核糖核酸酶A(Ribonuclease A,常用縮寫RNase A),一種含4個二硫鍵的單鏈多肽,分子量約為13.7 kDa(氨基酸序列)。作為一種核糖核酸內切酶(endoribonuclease),特異性降解單鏈RNA上的胞嘧啶(C)或尿嘧啶(U)殘基。具體來說,切割識別的是由某核苷酸上的5’-核糖和相鄰的嘧啶類核苷酸3’-核糖上磷酸基團形成的磷酸二酯鍵,從而使得2’, 3’-環(huán)磷酸水解為對應的3’-核苷磷酸(比如,pG-pG-pC-pA-pG經(jīng)RNase A切割產(chǎn)生pG-pG-pCp 和A-PG)。RNase A切割單鏈RNA活性最高,推薦工作濃度為1-100 μg/mL,兼容于各種反應體系。低鹽濃度(0-100 mM NaCl),可用來切割單鏈RNA,雙鏈RNA,以及RNA-DNA雜交形成的RNA鏈。然而,高鹽濃度(≥ 0.3 M),RNase A僅特異性切割單鏈RNA。
產(chǎn)品性質
CAS號(CAS NO.) | 9001-99-4 |
外觀(Appearance) | 白色凍干粉末 |
激活劑(Activator) | 鈉鹽、鉀鹽等 |
抑制劑(Inhibitor) | 核酸酶抑制劑 |
失活方法(Inactivation) | 加熱不會失活,建議用離心柱或者酚氯仿抽提來充分去除 |
來源(Source) | 牛胰腺 |
溶解性(Solubility) | 溶于水(10 mg/mL) |
酶活力(Activity) | ≥ 60 Kunitz units/mg |
配置存儲方法
此為RNase A儲存液配制的常用方法之一,也可以根據(jù)實驗室傳統(tǒng)的方法,或者參考文獻資料使用其他方法制備儲存液(如直接溶于10 mM Tris-HCl, pH 7.5或者Tris-NaCl溶液)。在中性條件下煮沸RNase A溶液,會有RNase沉淀形成;在更低的pH下將其煮沸,如有沉淀可以觀察到,可能由于蛋白雜質存在造成。煮沸之后若發(fā)現(xiàn)沉淀,可通過高速離心(13,000 rpm)去除雜質,然后分裝凍存。 |
1)利用10 mM的醋酸鈉(pH 5.2)制備10 mg/mL 的RNase A 儲存液; |
2)100℃加熱15 min; |
3)冷卻到室溫,加入1/10體積的1 M Tris-HCl(pH 7.4),調其pH至7.4(如:5 mL 10 mg/mL的RNase 儲存液加入500 μL 1 M Tris-HCl, pH 7.4); |
4)分裝于-20℃凍存,可穩(wěn)定保存長達2年。 |
訂購信息
產(chǎn)品名稱 |
貨號 | 規(guī)格 | 價格 |
RNA酶 |
G-05-0100 |
100mg | 詢價 |
RNA酶 |
G-05-1000 |
1g | 詢價 |
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